HPLC法内定脑心清片软膏华夏儿茶酸的含量
笔者：王少妹 罗杰 利幼 梁敬仪 贝伟剑
【撮要】 手段 构建脑心清片软膏华夏儿茶酸含量的内定办法。办法 采纳HPLC办法，色谱柱为依力特 C18柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)，以乙腈丙醇0.3%H3PO4为活动相停止梯度洗脱，检测跨度：260 nm，光速：1 mL/min，柱温：30 ℃。后果 归队方程为A=2508.6 m+63.241，r=0.999 1，线性范畴为0.1548～2. 4768 μg；均匀回收率为97.36%，RSD为1.21％。论断 该法可用来脑心清片软膏的半废品品质掌握。
【要害词】 脑心清片 原儿茶酸 高效液相色谱法
脑心清片是由单味柿叶提取物(以次职称脑心清片软膏)酿成的中成药，经临床考证，对于冠隐痛狭心症、脑动脉软化肥效明显，对于长久脑缺血发生、脑梗塞、脑血栓构成、脑血栓构成后遗症、括约肌梗死后遗症等伴生或者没有伴生高血压、高血压等多种心脑血脉疾病有优良的 医治 成效，并存正在定然的降血压、降血脂作用，临时服用未发觉有显然毒反作用［1, 2］。脑心清片软膏中的黄酮类活性因素的含量掌握已有 教案 简报［3］。脑心清片软膏中的另一度主要活性因素原儿茶酸［4］，存正在抗氧化、肃清自正在基和神经元掩护等性能［1,5］，其品质掌握是确保脑心清片高效保险的主要目标之一。白文以HPLC法内定脑心清片软膏中次要活性因素原儿茶酸的含量，为脑心清片软膏需要更片面的品质掌握办法。
1 试验资料
脑心清片软膏（柿叶提取物,由广州乌云山和记黄埔国药无限公司需要)；丙醇（色谱纯）；原儿茶酸比照品( 中国 食品生物制品测验所，批号：110809200503)。
Agilent1100高效液相色谱仪，DADG1315B可见紫外检测器。
2 办法与后果
2.1 色谱环境与零碎实用性
色谱柱：依力特 C18柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)；活动相:乙腈丙醇0.3%H3PO4，按表1停止梯度洗脱；检测跨度：260 nm；光速：1 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。实践板数按原儿茶酸 打算 没有低于2 500，拖尾因数1.03；比照品滤液主峰与供试品滤液华夏儿茶酸峰保存工夫的比率均应正在0. 990；原儿茶酸与其余因素无效结合,结合度大于1. 97,见图1。
2.2 比照品滤液制备与线性联系调查
精细称取原儿茶酸比照品过量，加丙醇溶化并定容，辨别配制各含原儿茶酸247.68、123.84、61. 92、30. 96、15.48 μg/mL的滤液，按“2.1”项色谱环境辨别进样10 μL各2次，内定峰面积，以峰面积（A）为纵坐标，比照品进样量(m)为横坐标，停止线性归队,得归队方程为
A=2508.6m+63.241，r=0.999 1
后果标明原儿茶酸进样量正在0.154 8～2. 476 8 μg的范畴外线性联系优良。
表1 梯度洗脱溶剂零碎（略）
Table 1 Slovent system
A.原儿茶酸比照品;B.脑心清片软膏
图1 脑心清片软膏华夏儿茶酸HPLC图谱（略）
Figure 1 The HPLC graph of protocatechuic acid in Naoxinqing
2．3 供试品滤液制备
精细称取脑心清片软膏约20 mg，加丙醇20 mL使其彻底溶化后,转入50 mL定量瓶,用丙醇定容，制废品质深浅约0.4 mg/mL 的滤液，0.45 μm微孔滤膜过滤,作为供试品滤液。
2．4 稳固性实验
取原儿茶酸比照品(品质深浅为61.92 μg/mL)丙醇滤液，辨别正在0、1、2、4、6、8、12、24 h进样10 μL，内定其峰面积。后果原儿茶酸的均匀峰面积为2 021.5，RSD值为1.36%。
2．5 精细度实验
取原儿茶酸比照品滤液(品质深浅为61.92 μg/mL)，反复进样6次, 内定原儿茶酸的峰面积，得均匀峰面积为2 038.6，RSD值为0.98%。
2.6 反复性实验
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取脑心清片软膏样品（批号C6A002）,按“2.3”项下办法制备6份供试品滤液，辨别内定原儿茶酸含量，后果原儿茶酸含量的RSD值为2.16%。
2.7 回收率实验
取同一批已内定含量的脑心清片软膏的供试品6份，每份约20 mg，辨别精细退出200.82 μg/mL原儿茶酸比照品丙醇滤液4.5 mL（相等于20 mg软膏所含原儿茶酸的量），按“2.3”项下办法制备，内定峰面积， 打算 原儿茶酸含量和回收率，后果均匀回收率为97.36%,RSD为1.21%，见表2。
表2 原儿茶酸的回收率实验后果（略）
Table 2 The Recoveries of protocatechuic acid in HPLC assay
2.8 样品内定
辨别按“2.3”项办法制备3批脑心清片软膏的供试品滤液,按“2.1”项下色谱环境停止内定。后果批号C6A001、C6A002、C7A001的样品华夏儿茶酸的含量辨别为44.5、45.9、44.7 μg/mg。
3 议论
眼前已简报的柿叶无机酸复合物有原儿茶酸、琥珀酸和糠酸等多种无机酸因素［1, 4］。原儿茶酸存正在抗氧化、肃清自正在基和神经元掩护等性能［1, 5］,是脑心清片软膏中的一度主要活性因素。
白文将HPLC法使用于脑心清片软膏的原儿茶酸含量内定,后果标明办法牢靠、可行，为脑心清片的半废品品质掌握需要了一度新道路。
【 参考 教案 】
［1］ BEi WEIjian，PENG W L, XU A L,et al. Neuroprotective effects of a standardized extract of diospyros kaki leaves on MCAO transient focal cerebral ischemic rats and cultured neurons injured by glutamate or hypoxia［J］. Planta Medica, 2007，73:636-643.
［2］ 蔡过冬，杨少锋.脑心清片 医治 脑动脉软化症和冠隐痛狭心症60例临床 小结 ［J］.国药新药与临床药理,2001，12(6)：414-416.
［3］ 罗杰，贝伟剑，徐腾，等.脑心清片品质规范的钻研［J］. 中国 新药刊物，2004，13（7）：625-627.
［4］ 周法兴,梁培瑜,文洁,等.柿叶化学因素钻研［J］.国药通报,1987,12(10):38.
［5］ 姚江雄,贝伟剑.脑心清片防疫脑动脉软化钻研停顿［J］.广东药学,2004，22：47-51
