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HPLC法内定雪隆胶囊中东莨菪素和伞状花内酯的含量

                      笔者：杨燕霞 白杨 刘西京 贾强

【撮要】   手段 内定雪隆胶囊中东莨菪内酯和伞型花内酯的含量。办法 采纳高效液相色谱法，色谱柱为Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm, 5 μm），活动相为丙醇四氢呋喃水滤液停止梯度洗脱，检测跨度为346 nm。 后果 东莨菪内酯均匀回收率为99.3％，RSD为0.81％，伞型花内酯的均匀回收率为99. 6％，RSD为1.03％。论断 此法烦琐、精确、精细度高、再现性好,可用来该药剂的品质掌握。 中国佳诚论文网www.thesislib.com编者。

【要害词】   雪隆胶囊 东莨菪内酯 伞状花内酯 高效液相色谱法

雪隆胶囊由水母雪莲花和塞隆骨组成,存正在散寒除湿、补益肝肾的效用，主治骨骨节炎、发潮阻络、肝肾有余症、骨节疼痛、肿胀、屈伸有利、遇寒减轻和腰膝酸软等, 收载于保健部部颁规范。方中的雪莲花为罕用藏药，塞隆骨为国度一类植物药草。 教案 ［1］对于雪莲停止了薄层钻研，并用分光光度法内定了塞隆骨中L羟脯氨酸的含量。本品中的水母雪莲有清热解毒、消炎止痛的效用，内中含有黄酮、香豆素类等复合物。水母雪莲的超临界提取物中的次要因素为东莨菪内酯、伞状花内酯［2］，省外试考证实，该提取物存正在较好的抑菌、抗菌活性作用，对于小鼠耳肿胀抗炎活性明显，同声还存正在明显的抗滴虫作用［3］。为进一步的进步该药剂的品质，本试验采纳高效液相法内定内中主药水母雪莲中的无效因素东莨菪素和伞状花内酯的含量。

　　1    仪表与试剂

　　1.1    仪表
      　　
　　高效液相色谱仪LC210AT泵、SPD2M10A二极阵列检测器、Class2VP VER6. 1任务站(阿曼岛津)，N1000缭绕沸腾仪（阿曼东京生化EYELA公司），BP211D、ALC210.4 电子 综合天平（瑞士沙多利斯Sartorius公司），T660H低声波荡涤器（德国埃玛Elma公司）。

　　1.2    试剂
      　　
　　东莨菪素和伞状花内酯比照品(购自美国sigma公司，纯度≥96％)；雪隆胶囊(三河方大药业无限义务公司消费,批号050901、050910、050913)；塞隆骨（Osteon myospalacem Baileyi）购自广东清平市面，经深圳市食品测验所刘尧执业药师鉴定；丙醇、乙腈为色谱纯；酒精为综合纯。
     
　　2    办法与后果

　　2.1    色谱环境
      　　
　　以Phenomenex  C18（250 mm×4.6 mm, 5 μm）为色谱柱；以丙醇四氢呋喃水滤液(四氢呋喃∶水＝1∶13，用乙酸调pH至2.5)为活动相，梯度洗脱：0→8→13→33→43 min，丙醇（容积比）：40％→40％→60％→100％→100％，四氢呋喃水滤液（容积比）：60％→60％→40％→0％→0%；检测跨度：346 nm；柱温：室温；光速：1.0 mL/min。

　　2.2    比照品滤液的制备
      　　
　　精细称取东莨菪素比照品过量,加丙醇酿成每1 mL含20 μg的滤液,即得。精细称取伞状花内酯比照品过量，加丙醇酿成每1 mL含30 μg的滤液，即得。

　　2.3    供试品滤液的制备
     
　　取本品形式物1 g,精细称定,置具塞扇形瓶中,退出丙醇25 mL,称定分量,超声（220 V，50 Hz）解决40 min,滤过，兼并溶液，减压回收丙醇至近干，残渣用丙醇容量转移至10 mL量瓶中，并加丙醇至刻度，摇匀。滤过，精细汲取续溶液1 mL，用丙醇定容至10 mL量瓶中，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续溶液，即得。

　　2.4    线性联系调查
   
　　取东莨菪素比照品过量,加丙醇辨别酿成每1 mL含东莨菪素比照品5、10、15、20、25、30 μg的滤液,辨别汲取20 μL,注入液相色谱仪,记载色谱图。以峰面积（A）为纵坐标,以品质深浅（ρ）为横坐标,制图东莨菪素规范直线,得归队方程A=1.5848ρ＋0.0172(r=0.999 9)。后果标明:东莨菪素品质深浅正在5～30 μg/mL范畴内与峰面积呈优良的线性联系。
     
　　取伞状花内酯比照品过量，加丙醇辨别酿成每1 mL含伞状花内酯比照品7.5、15、22.5、30、37.5、45 μg的滤液,辨别汲取20 μL，注入液相色谱仪，记载色谱图。以峰面积（A）为纵坐标,以品质深浅（ρ）为横坐标,制图伞状花内酯规范直线，得归队方程A=1.1067ρ＋0.2571(r=0.9996)。后果标明:伞状花内酯品质深浅正在7.5～45 μg/mL范畴内与峰面积呈优良的线性联系。

　　2.5    专属性实验
      　　
　　取按便条对比缺水母雪莲的阳性比照样品、东莨菪素比照品、伞状花内酯比照品、供试品按“2.1”项下色谱环境进样内定，色谱图见图1 。后果标明，阳性比照样品的色谱图正在东莨菪素和伞状花内酯保存工夫的呼应地位上无色谱峰涌现,标明此办法专属性强,阳性比照无搅扰。
     
　　A.东莨菪素比照品;B.伞状花内酯比照品;C.雪隆胶囊;D.雪莲阳性比照品

　　图1    高效液相色谱图（略）

　　Figure 1    HPLC chromatogram

　　2.6    精细度实验
      　　
　　辨别取上述比照品滤液各20 μL，反复进样5次守法内定， 打算 东莨菪素比照品峰面积的RSD为1.77%，伞状花内酯比照品峰面积的RSD为0.  95%，标明精细度较好。中国佳诚论文网www.thesislib.com编者。

　　2.7    稳固性实验
     
　　取供试品滤液，室温下辨别搁置0、1、4、8、12、24 h后，守法操作，内定峰面积，打算东莨菪素峰面积的RSD为2.25%，伞状花内酯峰面积的RSD为1.20%，标明稳固性较好。

　　2.8    反复性实验
          
　　精细称取雪隆胶囊样品(批号050901）6份，按“2.3”项下办法制备滤液，进样内定，打算得东莨菪素的均匀含量为7.83 mg·粒-1，RSD为1.26%，伞状花内酯为14.  49 mg·粒-1，RSD为0.65%，标明办法反复性较好。

　　2.9    加样回收率实验
     
　　精细汲取已知含量的样品(批号：050901，东莨菪素的含量为7.83 mg·粒-1，伞状花内酯的含量为14.49 mg·粒-1)过量，再辨别精细退出定然量的比照品，按样品内定项收操作，守法内定，打算回收率，后果见表1、表2。

　　2.10    样品含量内定
     
　　取供试品3批,按“2.3”项下办法制备滤液，进样内定,后果见表3。

　　表1    东莨菪素回收率实验后果（略）

　　Table 1    Recovery test of scopoletin

　　表2    伞状花内酯回收率实验后果（略）

　　Table 2    Recovery test of umbelliferone

　　表3    雪隆胶囊的含量内定后果（略）

　　Table 3    Contents of scopoletin and umbelliferone in the capsules

　　3    议论
      　　
　　白文采纳高效液相色谱法停止含量内定，对于雪隆胶囊中的主要因素东莨菪素和伞状花内酯正在同一色谱环境下停止内定，办法烦琐、精确,锐敏度、再现性、回收率均相符请求。

【 参考 教案 】
  　　［1］ 魏立新.雪隆胶囊的品质规范钻研［J］.中草药，2001，32（6）：510.

　　［2］ 葛发欢.水母雪莲花超临界CO2萃取物化学因素钻研［J］.国药草，2002，25（10）：18-20.

　　［3］ 贾强，白杨，刘远，等. HPLC法内定雪隆胶囊中东莨菪素的含量［J］. 中国 西药店，2008，19（18）：1396-1398.